Ahoj! Som dodávateľ bioreaktorov a dnes sa s vami chcem podeliť o to, ako zbierať bunky z bioreaktora. Je to zásadný krok v mnohých bioprocesoch, či už pracujete na liečivách, biopalivách alebo len robíte skvelý výskum.
Najprv si povedzme, prečo je zber buniek taký dôležitý. Keď pestujete bunky v bioreaktore, v podstate vytvárate malý ekosystém, v ktorom môžu bunky prosperovať a robiť svoje veci. Ale v určitom bode musíte tieto bunky dostať von, aby ste ich mohli použiť na akýkoľvek konečný cieľ. Možno získavate hodnotný proteín, ktorý vyprodukovali, alebo ich používate na výrobu novej dávky niečoho. Nech je to čokoľvek, správny zber buniek je kľúčom k dosiahnutiu dobrých výsledkov.
Predzberová príprava
Predtým, než budete myslieť na zber buniek, musíte sa uistiť, že je všetko správne nastavené. Skontrolujte podmienky bioreaktora. Chcete poznať hustotu buniek, životaschopnosť a celkové zdravie kultúry. Na získanie týchto informácií môžete použiť mikroskop alebo nejaké luxusné automatické počítadlá buniek. Tiež sa uistite, že všetko vaše zberacie zariadenie je čisté a pripravené na použitie. To zahŕňa veci ako odstredivky, filtre a zberné nádoby.
Ak používate jeden z našichRastlinné tkanivo Bunková kultúra Sklenený fotobioreaktor, je navrhnutý tak, aby vám poskytol jasný pohľad na bunkovú kultúru vo vnútri. Môžete jednoducho sledovať rast a rozhodnúť sa, kedy je ten správny čas na zber. Sklenená konštrukcia tiež uľahčuje čistenie a sterilizáciu, čo je mimoriadne dôležité, aby sa zabránilo kontaminácii.
Metódy zberu
Existuje niekoľko rôznych spôsobov zberu buniek z bioreaktora a spôsob, ktorý si vyberiete, závisí od niekoľkých faktorov, ako je typ buniek, ktoré pestujete, rozsah vašej operácie a vaše konečné použitie.
Centrifugácia
Centrifugácia je jednou z najbežnejších metód. Funguje tak, že bunkovú kultúru otáča vysokou rýchlosťou, čo spôsobuje oddelenie buniek od tekutého média. Ťažšie bunky klesnú na dno centrifugačnej skúmavky a vytvoria peletu, zatiaľ čo ľahšia kvapalina (supernatant) zostáva na vrchu.
Aby ste to dosiahli, najskôr preneste bunkovú kultúru z bioreaktora do centrifugačných skúmaviek. Uistite sa, že ste skúmavky v odstredivke správne vyvážili, aby ste predišli akýmkoľvek nehodám. Potom nastavte vhodnú rýchlosť a čas odstreďovania. To sa môže líšiť v závislosti od typu bunky. Napríklad bunky cicavcov môžu potrebovať nižšiu rýchlosť v porovnaní s bakteriálnymi bunkami.
Po dokončení centrifugácie opatrne odstráňte supernatant. Môžete použiť pipetu alebo len jemne odliať. Bunková peleta na dne je to, čo hľadáte. Potom môžete bunky resuspendovať v novom pufri alebo médiu na ďalšie spracovanie.
Ak pracujete vo väčšom meradle, môžete použiť odstredivku s kontinuálnym prietokom. Sú skvelé pre priemyselné aplikácie, kde potrebujete rýchlo spracovať veľký objem bunkovej kultúry. nášParalelný bioreaktor z nehrdzavejúcej ocele Photo Lightmožno ľahko integrovať so systémom odstredivky s kontinuálnym prietokom, čím je proces zberu efektívnejší.
Filtrácia
Filtrácia je ďalšou možnosťou, najmä pre články, ktoré sú citlivé na šmykové sily. Pri tejto metóde prechádzate bunkovou kultúrou cez filter s dostatočne malými pórmi, aby zachytili bunky a zároveň umožnili priechod tekutému médiu.
Existujú rôzne typy filtrov, ktoré môžete použiť, napríklad membránové filtre alebo hĺbkové filtre. Membránové filtre sú presnejšie a môžu vám poskytnúť veľmi čisté oddelenie, ale môžu sa tiež ľahko upchať. Na druhej strane hĺbkové filtre zvládnu viac nečistôt a sú lepšie pre operácie väčšieho rozsahu.
Pri použití filtrácie sa musíte uistiť, že je filter správne nainštalovaný a že nevyvíjate príliš veľký tlak, ktorý by mohol poškodiť články. Možno budete musieť bunkovú kultúru vopred ošetriť, aby ste odstránili všetky veľké častice, ktoré by mohli upchať filter.
Flokulácia
Flokulácia je metóda, pri ktorej pridáte do bunkovej kultúry chemické činidlo, aby sa bunky zhlukovali. Tieto zhluky sa potom ľahšie oddelia od tekutého média. Táto metóda sa často používa na zber mikrobiálnych buniek.
Flokulačným činidlom môže byť polymér alebo soľ. Musíte starostlivo kontrolovať množstvo činidla, ktoré pridáte, pretože príliš veľa môže mať negatívny vplyv na bunky. Akonáhle sa bunky vyvločkujú, môžete použiť buď centrifugáciu alebo filtráciu, aby ste oddelili zhluky od kvapaliny.
Manipulácia po zbere úrody
Po zbere buniek s nimi musíte zaobchádzať opatrne, aby ste zachovali ich životaschopnosť a funkčnosť. Ak bunky hneď nepoužijete, možno ich budete musieť uložiť. Bunky môžete zmraziť v kryoprotektančnom roztoku pri veľmi nízkych teplotách. To pomáha predchádzať tvorbe ľadových kryštálikov, ktoré môžu poškodiť bunky.
Musíte tiež analyzovať zozbierané bunky, aby ste sa uistili, že spĺňajú vaše normy kvality. To môže zahŕňať testovanie na životaschopnosť buniek, obsah proteínov alebo iné relevantné parametre.
Riešenie problémov
Niekedy veci počas zberu buniek nejdú podľa plánu. Tu sú niektoré bežné problémy a spôsoby ich riešenia:
- Nízka regenerácia buniek: Môže to byť spôsobené nesprávnym odstreďovaním alebo filtráciou. Skontrolujte nastavenia vášho zariadenia a uistite sa, že sa bunky v procese nestrácajú. Možno budete musieť upraviť metódu zberu, ak sú bunky príliš krehké.
- Kontaminácia: Ak si všimnete známky kontaminácie, ako sú nezvyčajné farby alebo zápach v odobratých bunkách, môže to byť spôsobené tým, že vaše vybavenie nebolo správne sterilizované. Pred a po každom použití nezabudnite vyčistiť a sterilizovať všetko svoje vybavenie.
- Poškodenie buniek: Šmykové sily počas odstreďovania alebo filtrácie môžu poškodiť bunky. Skúste znížiť rýchlosť alebo tlak, aby ste to minimalizovali. Môžete použiť aj jemnejšiu metódu zberu, ako je flokulácia.
Záver
Zber buniek z bioreaktora je viackrokový proces, ktorý si vyžaduje starostlivé plánovanie a realizáciu. Výberom správneho bioreaktora, akým je ten nášRastlinné tkanivo Bunková kultúra Sklenený fotobioreaktor,Paralelný bioreaktor z nehrdzavejúcej ocele Photo Light, aleboSystém pilotného bioreaktora v tuhom stavea vhodnou metódou zberu môžete zabezpečiť úspešný zber buniek.
Ak máte záujem dozvedieť sa viac o našich bioreaktoroch alebo máte akékoľvek otázky týkajúce sa bunkového zberu, neváhajte nás kontaktovať. Sme tu, aby sme vám pomohli so všetkými vašimi potrebami v oblasti biospracovania. Či už ste malé výskumné laboratórium alebo veľké priemyselné zariadenie, máme pre vás ten správny bioreaktor. Kontaktujte nás, aby sme začali konverzáciu o vašich špecifických požiadavkách a poďme spolupracovať na dosiahnutí vašich cieľov v oblasti biospracovania.
Referencie
- Smith, J. (2018). Prevádzka bioreaktora: princípy a postupy. Academic Press.
- Jones, A. (2020). Bunkové kultivačné techniky. Wiley - Blackwell.
- Brown, C. (2019). Príručka biospracovania. CRC Press.